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双缩脲试剂 怎么配?
碱性条件下,双缩脲h2n-co-nh-co-nh2可以和cu离子作用生成紫色沉淀。
灵敏度差,测定范围窄,样品需要量大,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。 干扰测定的物质包括有:在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。
配制:
双缩脲试剂A是质量分数为0.1 g/mL的NaOH水溶液;双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液。
先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL,振荡均匀(营造碱性环境),再加入1~2滴双缩脲试剂B,振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。
具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
以上内容参考:百度百科-双缩脲试剂
双缩脲和双缩脲试剂有什么区别?
1、作用不同
斐林试剂是新配制的溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应。
2、使用方法不同
斐林试剂是在甲、乙两液等量混合后立即使用,而使用双缩脲试剂时应先加入A液1mL,摇匀,再加入B液4滴,摇匀,再观察实验现象。
3、组成成分不同
斐林试剂和双缩脲试剂虽然都由NaOH和CuS04两种成分配制而成,但是用量上还是有所不同。斐林试剂分为甲液和乙液两种,其中甲液为0.1g/mL的NaOH溶液,乙液为0•05g/mL的CuS04溶液。双缩脲试剂分为A液和B液,其中A液为0.1g/mL的NaOH溶液,B液为0.01g/mL的CuS04溶液。
注意事项:
在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的。
以上内容参考 百度百科—双缩脲试剂、百度百科—双缩脲
斐林试剂和双缩脲试剂区别是什么?
1、溶液浓度不同:CuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.05g/mL。CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为0.01g/mL。
2、使用原理不同:斐林试剂是新配制的溶液,在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。发生的是双缩脲反应。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
3、使用方法不同:斐林试剂使用时,先等体积混合甲、乙两液,而后立即使用,反应需要加热(有时不加热也反应)。双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(1mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象。
扩展资料:
注意事项:
分析实验所用的溶液应用纯水配制,容器应用纯水洗三次以上,溶液要用带塞的试剂瓶盛装。
配制好的试剂应及时盛入试剂瓶,试剂瓶上必须有标明名称、浓度和配制人,配制日期,有效期限。
溶液储存时应注意不要使溶液变质,配制硫酸、磷酸、硝酸、盐酸等溶液时,应把酸倒入水中。
参考资料来源:百度百科-斐林试剂
参考资料来源:百度百科-双缩脲试剂
双缩脲试剂a液和b液分别是什么?
双缩脲试剂A是氢氧化钠溶液,双缩脲试剂B是硫酸铜溶液。
相关介绍:
双缩脲试剂(外文名:Biuret Reagent)是用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。
它是碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成,在遇到蛋白质时显紫色。
双缩脲试剂A是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液,双缩脲试剂B硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
先将双缩脲试剂A 3mL加入组织样液3mL,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加入1~2滴双缩脲试剂B,振荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
以上内容参考:百度百科-双缩脲试剂
双缩脲试剂成分
双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液。
双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时,试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/mL。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。