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苏木精伊红染色(苏木精伊红染色法)

luoke 2024-05-04 0

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苏木精染色是染什么的

苏木精染色是染什么的呢?还不知道的小伙伴们一起来了解一下吧。

苏木精是染细胞的,它可以将细胞染色,与伊红结合使用可以将细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色,细胞质和细胞外基质中的成分着红色,被广泛用于组织学、胚胎学、病理学教学与科研中。

苏木精指的就是苏木素,是一种有机物,化学式为C16H14O6,为褐色结晶粉末,用作核和染色质的染色剂。

采用苏木素染色液进行免疫染色后的复染,操作步骤简便,操作时间短。可以操作步骤简便,操作时间短或培养细胞的染色,或与免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交等配合使用。使用苏木素染色液染色后还可以进行免疫染色或其它染料的复染。染色液也可以重复使用,直至认为效果不佳时再换用新的染色液。

以上就是小编今天的分享了,希望可以帮助到大家。

he染色是什么?

he染色是苏木精 — 伊红染色法。

苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。

苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

原理:

易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。

构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。

而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,pH值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。

HE染色法的原理及步骤

HE染色原理

HE 染色法为苏木精-伊红染色法,是石蜡切片技术里常用的染色法之一,也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基础、最广泛的技术方法。

属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色,为酸性的伊红使细胞着红色,其结果胞核呈蓝色,胞浆呈红色。两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率,在光镜下呈现出细胞图像。

HE染色法之所以成为细胞染色最常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外,还有物理作用中吸附、吸收效果,使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。

实验步骤

1、样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS洗涤3次。

2、样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。

3、染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。

4、分色:镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。

5、染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。

6、吹干或自然晾干细胞爬片后,中性树胶封片。

若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。

实验相关用品

1、固定液:常用95%乙醇和冰丙酮

2、苏木精染液:称取苏木精粉0.5g,铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中,然后取NaIO 31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均匀,滤纸过滤,备用。

3、伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于100ml蒸馏水中。

4、稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸。

5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。

6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。

实验结果

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。

HE染色试剂盒常见规格为3 10ml和3 100lm。

简述什么叫苏木精-伊红染色法

苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

苏木素染色法指使用苏木素的染色法。苏木素是从原产中南美的洋苏木(Haematoxylon campechianum L.)的心材提取出来的浅黄褐色的结晶。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

实验结果

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。

着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。

苏木精染色过强,影响伊红着色,怎么办

关于苏木精染色过强,影响伊红着色问题,实验需要重做并按以下注意事项进行。

1、组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分,若溶蜡剂使用过久应及时更换以免效率降低,若室温过低,可将溶蜡剂置于温箱中进行脱蜡。

2、苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物,这可能是液体表面的过氧化物,必须过滤除去,以防沉渣污染组织切片。苏木素液一般染过三、四百张切片后,着色力会减弱,着色不鲜艳,呈灰蓝色时应及时更换新液。

3、染色的时间长短需依据:染剂对组织的染色作用,室温条件,切片厚薄,固定液的类别,染液的新旧而进行调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。

4、分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键,若分化失当则必然引起染色不匀或过淡,过深等现象,因此分化后一定要镜检,观察胞核是否清晰,胞浆呈淡白色。否则需再次分化,不然一旦复染后,组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。

5、还原液不宜过浓,若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。

6、红宜淡染,复染过深胞核会不清晰,影响镜检。

7、若脱水,透明等步骤不够彻底,则组织表面会有一层雾状膜。若有这一现象,应立即更换纯酒精脱水,再次透明。在潮湿的季节里应注意酒精的浓度、若降低要及时更换。

8、染色后的组织切片、要将组织四周的污染物痕迹擦掉,以免影响美观。

9、封固剂要适量,滴加时应小心倾滴,盖玻片要轻轻放置,以免气泡产生影响镜检。盖玻片大小选择要合适,一般要大于组织块,以防封盖不全,盖玻片要放正,标签贴牢,编号清楚。从而保证切片的封藏和美观。

10、染好的切片应妥为保存,更应避免日光照射,否则切片容易褪色。

苏木精-伊红是染什么的啊??

苏木精-伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。

苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

1、苏木精:

苏木精是染细胞核的优良材 料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。它是淡黄色到锈紫色的结晶体,难溶于冷水和乙醚和甘油,易溶于热水和热酒精,溶于碱、氨和硼砂的溶液,

分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸—酒精)分化后呈红色 ,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。

2、伊红:

伊红(eosin)为酸性染料,将细胞质和细胞间质染为粉红色·切片在染色前需要脱蜡,染色后用中性树胶或DPX封片,以便长期保存 ,伊红是一种红色酸性染料.在微生物学实验中,用于鉴别产酸性细菌的一种培养基添加剂。

扩展资料:

苏木精 -伊红染色结果分析:

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。

着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。

参考资料来源:百度百科-苏木精

参考资料来源:百度百科-伊红

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