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黏性末端是指哪一部分 黏性末端是指代的部分
1、黏性末端是被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,它们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。
2、当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时,产生的就是黏性末端,而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时,产生的则是平末端。
基因的不同黏性末端要怎样连接?
不同的黏性末端原则上无法直接连接,但可将它们转化为平头末端后再进行连接,所产生的重组分子往往会增加或减少几个碱基对,并且破坏了原来的酶切位点,使重组的外源DNA片段无法回收;若连接位点位于基因编码区内,则会破坏阅读框架,使之不能正确表达。
不同黏性末端的连接有四种类型:①待连接的两种DNA分子都具有5′突出末端。在连接反应之前,两种DNA片段或用Klenow酶补平,或用S1核酸酶切平,然后进行连接。前者产生的重组分子多出4对碱基,而后者产生的重组分子则少去4对碱基。一般情况下大多使用Klenow酶补平的方法,因为S1核酸酶量如果掌握不好,容易造成双链DNA的降解反应;
②待连接的两种DNA分子都具有3′突出末端。Klenow酶对这种结构没有活性,可以用Tsubscript4subscript:DNA聚合酶将这两种DNA的3′突出末端切除,形成平头末端后再连接,所产生的重组分子同样少了4对碱基;
③一种DNA分子具有3′突出末端,另一种DNA分子携带5′突出末端。这种情况要求两种DNA分子在连接前,分别进行相应的处理,若5′突出末端用Klenow酶补平,而3′突出末端用Tsubscript4subscript:DNA聚合酶修平,则连接产生的重组DNA分子并没有改变碱基对的数目;
④两种DNA分子均含有不同的两个黏性末端。通常先用Klenow酶补平一种DNA分子的5′突出末端,再用Tsubscript4subscript:DNA聚合酶切平3′突出的另一末端,而且两种DNA分子可以混合一同处理。
在有些情况下,含有不同5′突出黏性末端的两种DNA分子经Klenow酶补平连接后,形成的重组分子可恢复一个或两个原来的限制性内切酶识别序列,甚至还可能产生新的酶切位点,如emphasis:role=italicXbaemphasisI与emphasis:role=italicHindemphasisⅢ的黏性末端(emphasis:role=italicXbaemphasisI切点恢复)、emphasis:role=italicXbaemphasisI与emphasis:role=italicEcoemphasisRI(两者切点均保留)以及emphasis:role=italicBamemphasisHI与emphasis:role=italicBglemphasisⅡ(产生emphasis:role=italicClaemphasisI位点)。
粘性末端是什么意思
限制酶在识别序列进行交错切制。结果形成两条单链末端,这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键,所以称为黏性末端,简称黏端。那么粘性末端是什么意思呢?
粘性末端是什么意思
1、黏性末端是指被限制酶切开的DNA双链的切口,很多情况下不是平齐的,而是一根链长出一点,比如:AAAAAAAAAATTTTTTTTTT切开以后可能变成:AAAA AAAAAATTTTTTTTTT这样的末端能够通过碱基互补结合,好像有黏性。
2、但如果切出来是平齐末端,就不是黏性的。另外,用不同的酶切出来的两截的末端,即使不是平齐末端,但是两边长出来的部分如果不能互补,也不是黏性末端。
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